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NRPB52L 重组蛋白L琼脂糖凝胶FF

发布日期:2018-10-27 阅读次数:2145

品  名:重组蛋白L琼脂糖凝胶FF

英文名:Recombinant Protein L NUPharose Fast Flow, rProtein L NUPharose FF

目录号:NRPB52L、NRPB52S(预装柱)

规  格:20 ml,100 ml,1L,1 ml预装柱,5 ml预装柱,特殊规格订制

运  输:2 ~ 25℃,常压、避光

贮  存:20%乙醇,2-8℃

保质期:3年


相关介绍:

重组蛋白L琼脂糖凝胶FF是将重组大消化链球菌蛋白L(Recombinant Peptostreptococcus magnus Protein L,简称r-PPL)偶联在高度交联的琼脂糖凝胶上的一种亲和纯化介质。大消化链球菌蛋白L(PPL)能与抗体的κ轻链结合而不会影响抗体的抗原结合位点,这一特性使其与结合抗体Fc区域的蛋白A、蛋白G相比,能更广泛地结合各种来源及亚类的抗体。如人类的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD,以及含κ轻链(人类1、3、4型,小鼠1型)的Fab、scFv等抗体片段。但不能与重链、λ轻链、κ轻链(2型)结合,所以重组蛋白L琼脂糖凝胶FF不能纯化牛、山羊、绵羊、鸡来源的抗体。


技术指标:

基质

4%高度交联琼脂糖凝胶

配基

重组蛋白L

配基密度

6 mg/ml

填料粒径

60~180 μm

最大流速

800 cm/h

推荐流速

20-100 cm/h

工作(清洗)pH

2~9(2~10)

0.3 MPa

载量

40 mg/ml human IgG


抗体与蛋白A、蛋白G的结合力:

种类

Species

亚型

Antibody Class

蛋白A

Protein A

蛋白G

Protein G

蛋白L

Protein L

Human

IgG1

IgG2

IgG3

IgG4

IgM

IgD

IgA

Fab

+++

+++

+

+++

+

-

+

+

+++

+++

+++

+++

-

-

-

+

+++

+++

+++

+++

+++

+++

+++

+++

小鼠

Mouse

IgG1

IgG2a

IgG2b

IgG3

IgM

+

+++

+++

+++

-

++

+++

+++

+++

-

+++

+++

+++

+++

+++

大鼠

Rat

IgG1

IgG2a

IgG2b

IgG2c

+

-

-

+++

++

+++

+

+++

+++

+++

+++

+++

Cow

IgG1

IgG2

+

+++

+++

+++

-

-

山羊

Goat

IgG1

IgG2

+

+++

+++

+++

-

-

Horse

IgG(ab)

IgG(c)

IgG(T)

+

+

-

-

-

+++

NA

NA

NA

Rabbit

IgG

+++

+++

+

Pig

IgG

+++

+

+++

Dog

IgG

+++

+

NA

Chicken

IgY

-

-

-

注:-表示不结合;+表示微弱结合;++表示中等结合;+++表示很强结合;NA表示暂无数据。能用于亲和纯化的抗体一般需要中等以上的结合力。


应用举例:

结合缓冲液:20 mM磷酸盐缓冲液(PB),pH 7.4

洗脱缓冲液:0.1 M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,pH 2.7

中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 9.0

1)1 ml重组蛋白L琼脂糖凝胶FF预装柱,用5~10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液;

2)用结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积;

3)将3 ml小鼠腹水用结合缓冲液稀释至15 ml,0.45 μm滤膜过滤上样;

4)用结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积至基线;

5)用洗脱缓冲液洗脱抗体,收集洗脱峰,并用中和缓冲液调节其pH至中性;

6)每次使用后再用3~5个柱床体积的洗脱缓冲液再生清洗;

7)SDS-PAGE(图1)电泳分析洗脱下来的小鼠单抗纯度在95%以上。



注意事项:

1)预填柱使用简易方便,在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。

2)样品洗脱后一般pH很低,应立即用碱性中和缓冲液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0) 将收集到的抗体溶液中和到中性,或在收集容器中事先装5%~20%、pH 7-9的缓冲液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。

3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果,如果已经产生气泡,可以自行重装柱子。

4)通常目标样品洗脱后应继续用0.1 M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH 2.0~2.7)洗3~5个柱体积,然后用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上,作简易再生。

5)使用数次后应进行在位清洗,建议用0.1% Triton X-100 37℃洗1-3个柱体积(10~30min),立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上;或70%乙醇洗5个柱体积以上(可保持4~16h),再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上;或10mM NaOH洗1-3个柱体积(10-20min),再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上。在位清洗能去除强疏水性蛋白质和脂类,恢复柱子的载量和流速。


导购指南

中文名

英文简称

货号

规格

产品描述

重力预装柱

重组蛋白L琼脂糖凝胶FF重力预装柱

ProL NUPharose FF pre-packed column

NRPB52S-Z11

1*1mL

1支*1ml

NRPB52S-Z41

4*1mL

4支*1ml

NRPB52S-Z15

1*5mL

1*5mL

NRPB52S-Z25

2*5mL

2支*5mL

AKTA中压预装柱

重组蛋白L琼脂糖凝胶FF中压预装柱

ProL NUPharose FF pre-packed column

NRPB52S-Y11

1*1mL

1支*1ml

NRPB52S-Y41

4*1mL

4支*1ml

NRPB52S-Y15

1*5mL

1*5mL

NRPB52S-Y25

2*5mL

2支*5mL

填料

重组蛋白L琼脂糖凝胶FF

ProL NUPharose FF

NRPB52L-10

10mL

1瓶*10ml

NRPB52L-20

20mL

1瓶*20ml

NRPB52L-100

100mL

1瓶*100ml

NRPB52L-500

500ml

1瓶*500ml

注:天博生物填料体积为实际琼脂糖凝胶体积




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